Fashioned enzymes: adjustment of properties of bacterial alkaline phosphatase to the enzymatic labelling

Des traceurs enzymatiques peuvent être aisément obtenus en fusionnant un gène codant pour une protéine ou un domaine protéique et le gène de la phosphatase alcaline d’Escherichia coli. Afin d’augmenter la sensibilité des tests réalisés avec ces conjugués, nous avons développé une stratégie pour augmenter la vitesse de catalyse de l’enzyme bactérienne. Dans une première étape, nous avons généré une forme inactive de l’enzyme, puis nous avons cherché des révertants. Finalement, la présence de seulement deux mutations suffit pour obtenir une enzyme ayant une constante de vitesse de catalyse augmentée d’un facteur~40 par rapport à l’enzyme sauvage et une thermostabilité conservée. En utilisant cette enzyme modifiée et le principe de la fusion de gènes, il est possible de fabriquer très facilement des traceurs enzymatiques performants et de développer des dosages avec de très hautes sensibilités.